您的ELISA試劑盒比色結(jié)果的表達(dá)方法對(duì)了嗎?
比色效果的表達(dá)以往通用光密度(oplical density,OD),現(xiàn)按規(guī)則用吸光度(absorbence,A),兩者含義相同。通常的標(biāo)明方法是,將吸收波長(zhǎng)寫于A字母的右下角,如OPD的吸收波長(zhǎng)為492nm,標(biāo)明方法為"A492nm"或"OD492nm"。
酶標(biāo)比色儀簡(jiǎn)稱酶標(biāo)儀,通常指于測(cè)讀ELISA試劑盒效果吸光度的光度計(jì)。關(guān)于固相載體方法的不相同,各有特制的適用于板、珠和小試管的規(guī)劃。許多試劑公司配套供應(yīng)酶標(biāo)儀。酶標(biāo)儀的主要功用目標(biāo)有:測(cè)讀速度、讀數(shù)的性、重復(fù)性、度和可測(cè)規(guī)劃、線性等等。優(yōu)異的酶標(biāo)儀的讀數(shù)通??傻?.001,性為±1%,重復(fù)性達(dá)0.5%。舉例說,若某孔測(cè)得的A值為1.083,則該孔相關(guān)于空氣的真實(shí)A值應(yīng)為1.083±0.01(1.073~1.093),重復(fù)測(cè)定數(shù)次,其A值均應(yīng)1.083±0.05(1.078~1.088)在之間。酶標(biāo)儀的可測(cè)規(guī)劃視各酶標(biāo)儀的功用而不相同。通常的酶標(biāo)儀在0.000~2.000,新類型的酶標(biāo)儀上限拓寬達(dá)2.900,甚至更高。超出可測(cè)上限的A值常以"*"或"over"或其它符號(hào)標(biāo)明。應(yīng)留心可測(cè)規(guī)劃與線性規(guī)劃的不相同,線性規(guī)劃常小于可測(cè)規(guī)劃,比如某一酶標(biāo)儀的可測(cè)規(guī)劃為0.000~2.900,而其線性規(guī)劃僅0.000~2.000,這在定量ELISA中標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)應(yīng)予留心。
酶標(biāo)儀不該安排在陽光或強(qiáng)光照射下,操作時(shí)室溫宜在15~30℃,運(yùn)用前先預(yù)熱儀器15-30分鐘,測(cè)讀效果更安穩(wěn)。
ELISA試劑盒測(cè)讀A值時(shí),要選用商品的活絡(luò)吸收峰,如OPD用492nm波長(zhǎng)。有的酶標(biāo)儀可用雙波長(zhǎng)式測(cè)讀,即每孔先后測(cè)讀兩次,在zui適波長(zhǎng)(W1),第2次在不活絡(luò)波長(zhǎng)(W2),兩次測(cè)定間不移動(dòng)ELISA試劑盒板的方位。例如OPD用492nm為W1,630nm為W2,畢竟測(cè)得的A值為兩者之差(W1-W2)。雙波長(zhǎng)式測(cè)讀可減少由容器上的劃痕或指印等形成的光煩擾。
肉眼判斷結(jié)果時(shí),顯色淺不易觀察,影響結(jié)果的準(zhǔn)確性,必須使用酶標(biāo)儀檢測(cè),以保結(jié)果一致性。
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