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您的ELISA試劑盒實驗,正在加載中嗎?

  • 發(fā)布日期:2018-06-28      瀏覽次數(shù):1674
    •     近有很多科研朋友們,在上留言,說ELISA試劑盒實驗一直進(jìn)行不下去了,那到底是什么原因?qū)е碌哪兀筷P(guān)注上海恒遠(yuǎn)生物,讓您zui快了解到科研資訊及科研實驗中那些有趣的事,今天我給大家?guī)砹薊LISA試劑盒實驗核心步驟,不知能否得到您的臨幸呢?
      在實驗時,溫度尤為重要
        血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測,嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測定的需-20℃保存。在建立ELISA方法作反應(yīng)動力學(xué)研究時,實驗表明,兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時,產(chǎn)物的生成可達(dá)。為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,也可用塑料貼封紙或保鮮膜覆蓋板孔,反應(yīng)板不宜疊放,以保證各板的溫度都能迅速平衡。應(yīng)注意溫育的溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。由于公司的試劑盒溫育是在空氣浴中完成,采用水浴會造成值偏高或花板。另外溫育中還有邊緣效應(yīng),邊上的值會偏高,建議為了客觀的判斷結(jié)果,將質(zhì)控放在非邊緣位置。
      相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)
          通常采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA),在選擇抗體上,選擇一個單抗和一個多抗進(jìn)行配對;若選擇兩個單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。ELISA實驗中為了確定*信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實驗中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時,應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。

                                
      基因工程抗原與合成肽抗原的區(qū)別
          基因工程抗原是抗原基因在質(zhì)粒載體中原核或真核表達(dá)的蛋白質(zhì)抗原,多以大腸桿菌或酵母菌為表達(dá)系統(tǒng)。該類抗原與合成肽相比,分子量大。合成肽采用化學(xué)方法制備,由于工藝的局限,合成數(shù)量有限,只能達(dá)到數(shù)百個氨基酸;而利用基因工程制備的抗原,分子量更大。
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