ELISA“花板”原因總結(jié)

    所謂“花板”，就是空白、陰陽(yáng)性對(duì)照及室內(nèi)質(zhì)控孔結(jié)果正常，而標(biāo)本孔的OD值卻偏高。“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn)，往往會(huì)給實(shí)驗(yàn)者判讀結(jié)果帶來(lái)麻煩。



    為了避免“花板”問(wèn)題的出現(xiàn)，降低檢測(cè)的假陽(yáng)性率，獲得更理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在檢測(cè)過(guò)程中應(yīng)采取下列措施：

    1.在選擇ELISA試劑時(shí)，應(yīng)選擇靈敏度高、特異性好、穩(wěn)定性好、批間差小、操作方便、省時(shí)的試劑。

    2.在所有標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，所用的儀器及加樣過(guò)程都處于正常狀態(tài)的情況下，步驟均按照各種試劑說(shuō)明書(shū)的要求去做，排除實(shí)驗(yàn)所用儀器和操作步驟對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。

    3.血液標(biāo)本應(yīng)置于室溫下1-2h，使血液凝固收縮，然后離心檢測(cè)或讓血液過(guò)夜后再檢測(cè)。這樣才能使得血液充分收縮，讓標(biāo)本中的非特異性物質(zhì)所致的假陽(yáng)性率降至lowest。

    4.檢測(cè)之前，加大離心轉(zhuǎn)速，盡量延長(zhǎng)時(shí)間，使血細(xì)胞和纖維蛋白充分沉淀，讓血細(xì)胞與血清*分離。

    5.加樣時(shí)不能加入紅細(xì)胞或纖維蛋白，要按照操作說(shuō)明書(shū)去做，否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

    6.對(duì)于血清中存在的紅細(xì)胞或纖維蛋白原，可以在加樣前離心時(shí)得到控制，同樣也可以通過(guò)適當(dāng)增加洗滌次數(shù)和浸泡時(shí)間來(lái)進(jìn)一步減輕或避免對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。同樣，對(duì)于血液存在的非特異性的IgG，增加洗滌次數(shù)和延長(zhǎng)浸泡時(shí)間也同樣有效。

    7.封板溫育時(shí)，各孔一定要封嚴(yán)，防止陽(yáng)性標(biāo)本的液體蒸發(fā)，產(chǎn)生周邊現(xiàn)象從而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

    8.孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，增加了固相載體吸附非特異性蛋白的可能性，也會(huì)造成“花板”。因此，除把握孵育時(shí)間外，在加樣過(guò)程中也應(yīng)嚴(yán)格控制時(shí)間，標(biāo)本較多時(shí)可分批操作。

    9.手工洗板時(shí)應(yīng)注意液體被濺出或孔與孔之間的液體溢出，連成整體液面后產(chǎn)生“花板”。

    10.用洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過(guò)程中易產(chǎn)生拖帶現(xiàn)象而導(dǎo)致“花板”的出現(xiàn)。

    11.洗液的溫度也會(huì)影響洗板的干凈程度，尤其是冬天溫度過(guò)低時(shí)容易出現(xiàn)“花板”問(wèn)題。

    12.洗液要注滿孔，孔壁洗滌不干凈也易造成“花板”現(xiàn)象。

    13.洗液要盡量新鮮配制，放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)易產(chǎn)生絮狀物或渾濁，造成堵孔或花板。

    14.有些廠家的試劑顯色液不穩(wěn)定，使用前容易變藍(lán)，如在實(shí)驗(yàn)前不仔細(xì)檢查，很容易導(dǎo)致“花板”現(xiàn)象的發(fā)生，這也提醒實(shí)驗(yàn)者應(yīng)使用新鮮的顯色液，保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性。

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