血清滅活相關問題解答

1、問：加到培養(yǎng)基中的血清必須滅活嗎？

 
答：不是必須的，看做什么實驗了。
 
2、問：四季青胎牛血清滅活是56℃30分鐘嗎？
 
答：如果用于培養(yǎng)大多數(shù)的腫瘤細胞，血清一般是不需要滅活的，這樣可以有效保存血清中的生長因子。但是如果用于培養(yǎng)一些表面具有補體受體的細胞，如內皮細胞，血清是需要滅活，一般是56℃，30min。
 
3、問：我要做滋養(yǎng)細胞培養(yǎng)，胎牛血清要滅活嗎？
 
答：進口的一般都已滅活，國產的不一定，最好還是滅活一下再用較安全。
 
4、問：我用病毒上清轉染細胞，培養(yǎng)用的血清需要滅活嗎？因為血清中可能有些補體和抗體，是不是會影響轉染？我想未滅活的血清中含些抗體補體可能會和病毒相結合，影響轉染，正確嗎？細胞是單核細胞白血病細胞，病毒是病毒包裝細胞PT67收集的病毒上清。為什么要用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時，目的是什么？
 
答：血清一定要滅活，可以先用無血清培養(yǎng)基加病毒孵育幾小時以后再加血清。避免雜蛋白對病毒和宿主結合過程的干擾，一般是2-6小時，根據(jù)細胞的狀態(tài)決定。血清不一定需要滅活，滅活的目的是將血清中的補體滅活！這要根據(jù)實際情況而定，如果沒有把握那就滅活吧，也不麻煩56度半個小時。
 
5、問：(1)我買的是杭州四季青的新生牛血清，要滅活嗎？有些說法是需要，有些說直接解凍后就可以加入到培養(yǎng)基中；我配制胰蛋白酶液，用的是D-PBS，有關系嗎？
 
答：關于血清的熱滅活，是很多人感興趣也存在一定爭議的話題。大多數(shù)實驗室將血清的熱滅活還是作為常規(guī)來執(zhí)行，因為有兩個作用，第一是滅活補體，第二是滅活血清中可能存在的支原體。但是實驗者并沒有考慮熱處理對血清中的生長因子、氨基酸等成分帶來的負面影響。
 
在實驗室處理血清的時候，水浴箱在滅活過程中出現(xiàn)故障，溫度升高到80℃，血清變成了凝膠狀，重新處理另外一份血清，將兩份血清對比，發(fā)現(xiàn)高溫直接影響到血清所含的抗體蛋白。在56℃下滅活半小時以上，肯定也會對里面的蛋白起到破壞作用。熱滅活之后，血清放在四度冰箱久了，就會有沉淀產生，這常常會被認為是微生物污染或者是黑膠蟲污染。為了驗證到底有沒有污染，常常又會把血清放置37℃溫育，但是血清中的蛋白會進一步析出，最后還是要做鏡檢，無菌培養(yǎng)試驗，和革蘭氏染色試驗，非常麻煩。
 

有資料顯示，里面提到70%的實驗者認為滅活是理所當然的。常規(guī)滅活建議的溫度在45℃到62℃之間，而時間則從15分鐘到60分鐘不等。其中常用的手法是56℃熱處理30分鐘。隨著血清采集、處理、加工工藝的提高，許多早先認為是熱滅活的原因已經不再成立，只有少數(shù)對血清進行熱滅活的研究者在實驗中證實了這一步驟的有效性和必要性。有人比較過11個不同細胞株，發(fā)現(xiàn)其中熱滅活對6 個細胞株(HBAE，MDBK，Vero，成纖維細胞，MRC-5)的生長帶來負面影響，三個細胞株(FOX-NY，MDCK和CHO-K1)不受熱滅活的影響，而只有兩個細胞株(Balb/3T3，Sp2/0Ag14 hybrid)，在熱滅活之后，細胞生長有輕微的改善。所以，在正常的操作下，熱滅活通常對細胞的生長沒有明顯的促進作用。

 

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