瑞氏染液使用方法

瑞氏染液使用方法：

瑞氏染料是由堿性染料美藍(lán)（Methvlem blue）和酸性染料黃色伊紅（Eostm Y）合稱伊紅美藍(lán)染料即瑞氏（美藍(lán)－伊紅Ｙ）染料。
用甲醇作瑞氏染料溶劑，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶劑，有兩種作用：
（1）甲醇使瑞氏染料中美藍(lán)（M）與伊紅（E）在溶液中離解，可使細(xì)胞成分選擇性吸附其中的有色物質(zhì)而著色。
甲醇
ME（瑞氏染料）----→M+ + E-
在配制的瑞氏染液中美藍(lán)如放置過久即可氧化而含有天青，美藍(lán)天青與伊紅化合物能使核染成紫紅色，但不能使胞漿染為藍(lán)色，多余美藍(lán)就可以使胞漿染成藍(lán)色，染色主要是化學(xué)作用，是離子彼此結(jié)合的反應(yīng)。
（2）甲醇具有強(qiáng)大的脫水力，可將細(xì)胞固定在一定形態(tài)及增加細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高細(xì)胞對染料吸收作用，同時由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升溫，加速染色反應(yīng)。
染液配制
一、瑞氏染液配制：
瑞氏染料 830gm或1g
甲醇（AR） 500ml或600ml
1）先稱干燥（事先放入溫箱干燥過夜）瑞氏染料放置乳缽內(nèi)，用乳棒輕輕敲碎染料成粉末，再行研磨至聽不到研芝麻聲即呈細(xì)粉末，加少許甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸內(nèi)顯“一面鏡”光澤，而無染料粉粒沉著。
2）再加較多量甲醇研磨呈一面鏡光亮，靜置片刻，將上層液體倒入一清潔儲存瓶內(nèi)（用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重復(fù)數(shù)次，至乳缽內(nèi)染料及甲醇用完為止，搖勻，密封瓶口。
3）存室溫暗處，儲存愈久，則染料溶解、分解就越好，一般儲存3個月以上為佳。
二、緩沖液作用：
1）染色對氫離子濃度是十分敏感的，據(jù)觀察pH值的改變，可使蛋白質(zhì)與染料形成的化合物重新離解。
2）緩沖液須保持一定的pH使染色穩(wěn)定，PBS的pH 一般在6.4~6.8，
3）偏堿性染料可與緩沖液中酸基起中和作用，偏酸性染料則與緩沖液中的堿基起中和作用，使pH恒定。
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