葉綠素的實驗操作步驟具體介紹

葉綠素上市以來，由于試劑的穩(wěn)定性，特異性一直是我司銷售的試劑，上海恒遠生物科技有限公司代理葉綠素多年，產(chǎn)品質(zhì)量及服務一直深受老師同學們的厚愛。
葉綠素是一種二羧酸—葉綠酸與甲醇和葉綠醇形成的復雜酯，故可與堿起皂化反應而生成醇（甲醇和葉綠醇）和葉綠酸的鹽，產(chǎn)生的鹽能溶于水中，可用此法將葉綠素與類胡蘿卜素分開；葉綠素與類胡蘿卜素都具有光學活性，表現(xiàn)出一定的吸收光譜，可用分光鏡檢查或用分光光度計測定；葉綠素吸收光量子而轉(zhuǎn)變成激發(fā)態(tài)，激發(fā)態(tài)的葉綠素分子很不穩(wěn)定，當它變回到基態(tài)時可發(fā)射出紅光量子，因而產(chǎn)生熒光。葉綠素的化學性質(zhì)很不穩(wěn)定，容易受強光的破壞，特別是當葉綠素與蛋白質(zhì)分離以后，破壞更快，而類胡蘿卜素則較穩(wěn)定。葉綠素中的鎂可以被H 所取代而成褐色的去鎂葉綠素，后者遇銅則成為綠色的銅代葉綠素，銅代葉綠素很穩(wěn)定，在光下不易破壞，故常用此法制作綠色多汁植物的浸漬標本。

實驗步驟
1. 光對葉綠素的破壞作用
   1）取4支小試管，其中兩支各加入5ml用水研磨的葉片勻漿。另外兩支各加入2.5ml葉綠體色素乙醇提取液，并用95%乙醇稀釋1倍。
   2）取1支裝有葉綠素乙醇提取液的試管和1支裝有水研磨葉片均漿的試管，放在直射光下，另外兩支放到暗處，40min后對比觀察顏色有何變化，解釋其原因。
2. 熒光現(xiàn)象的觀察
取1支20ml刻度試管加入5ml濃的葉綠體色素乙醇提取液，在直射光下觀察溶液的透射光與反射光顏色有何不同。
3. 皂化作用（綠色素與黃色素的分離）
   1）在做過熒光現(xiàn)象觀察的葉綠體色素乙醇提取液試管中加入1.5ml 20%KOH-甲醇溶液，充分搖勻。
   2）片刻后，加入5ml苯，搖勻，再沿試管壁慢慢加入1～1.5ml蒸餾水，輕輕混勻（勿激烈搖蕩），于試管架上靜置分層。若溶液不分層，則用滴管吸取蒸餾水，沿管壁滴加，邊滴加邊搖動，直到溶液開始分層時，靜置。可以看到溶液逐漸分為兩層，下層是稀的乙醇溶液，其中溶有皂化的葉綠素a和b（以及少量的葉黃素）；上層是苯溶液，其中溶有黃色的胡蘿卜素和葉黃素。
4. 吸收光譜的觀察  將上述已分層的試管溶液，用分光鏡觀察兩類色素的吸收光譜，首先讓下層綠色素部分對準進光孔，看光譜有何變化；然后再將上層黃色素溶液對準進光孔，看光譜又有何變化。把觀察的結果用簡單的圖表示出來。
5. H 和Cu2 對葉綠素分子中Mg2 的取代作用
方法一：
   1）取兩支試管，*支試管加葉綠體色素提取液2ml，作為對照。第二支試管中加葉綠體色素提取液5ml，再加入5%HCl數(shù)滴，搖勻，觀察溶液顏色變化。
   2）當溶液變褐后，再加入少量醋酸銅粉末，微微加熱，觀察記載溶液顏色變化情況，并與對照試管相比較。
方法二：
另取醋酸－醋酸銅溶液20ml，以燒杯盛之。取新鮮植物葉片兩片，放入燒杯中，用酒精燈慢慢加熱，隨時觀察并記錄葉片顏色的變化，直至顏色不再變化為止。解釋原因。
注意事項
1．在低溫下發(fā)生皂化反應的葉綠體色素溶液，易乳化而出現(xiàn)白絮狀物，溶液渾濁，且不分層?？杉ち覔u勻，放在30～40℃的水浴中加熱，溶液很快分層，絮狀物消失，溶液變得清澈透明。
2．分離色素用的圓形濾紙，在中心打的小圓孔，周圍必須整齊，否則分離的色素不是一個同心圓。